అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ యొక్క ఉపయోగం మరియు జాగ్రత్తలు
1) తగిన అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌ని ఎంచుకోండి.UF పొరలు వివిధ రసాయనాలకు సహనం యొక్క స్థాయిలో విభిన్నంగా ఉన్నాయని గమనించండి.సాధారణంగా, 10 kDa మాలిక్యులర్ వెయిట్ కట్-ఆఫ్‌తో అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌లను మాలిక్యులర్ వెయిట్ కట్-ఆఫ్‌తో ఎంచుకోవచ్చు, ఇది 35 kDa వంటి ఆసక్తి ఉన్న ప్రోటీన్ యొక్క పరమాణు బరువులో 1/3 కంటే ఎక్కువ ఉండకూడదు.ఆసక్తి ఉన్న ప్రోటీన్ యొక్క పరమాణు బరువు సుమారు 10 kd ఉంటే, 3 KD యొక్క మాలిక్యులర్ వెయిట్ కట్-ఆఫ్‌తో అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌ను ఉపయోగించవచ్చు.
(2) అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్, తాజాగా కొనుగోలు చేయబడినది, పొడిగా ఉంటుంది, ఉపయోగించే ముందు అల్ట్రాపుర్ నీరు జోడించబడుతుంది మరియు కొన్ని నిమిషాల పాటు ముందుగా చల్లబడిన పొర, ఐస్ బాత్ లేదా రిఫ్రిజిరేటర్ గుండా నీరు పూర్తిగా పంపబడుతుంది.అప్పుడు నీరు పోస్తారు, అంటే ప్రోటీన్ ద్రవం, మరియు ఎంత జోడించబడింది, ట్యూబ్ పైభాగంలో ఉన్న తెల్లని గీత కంటే ఏది ఎక్కువ కాదు.ఆపరేషన్ తేలికగా ఉంటుంది మరియు ప్రోటీన్ ద్రావణాన్ని జోడించే ముందు అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌ను మంచు మీద చల్లబరచాలి.
3) ద్రవ్యరాశి మరియు గురుత్వాకర్షణ కేంద్రం రెండూ సమతుల్యతను చేరుకోవాలి.భ్రమణ వేగం మరియు త్వరణం చాలా వేగంగా ఉండవు, లేకుంటే నేరుగా అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ మెమ్బ్రేన్ దెబ్బతింటుంది.సెంట్రిఫ్యూగల్ అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ప్రారంభించబడింది (సెంట్రిఫ్యూజ్ 4 డిగ్రీలకు ప్రీకూల్ చేయబడింది).వేర్వేరు సెంట్రిఫ్యూజ్‌ల RPMని gకి మార్చిన తర్వాత, అది భిన్నంగా ఉంటుంది.సెంట్రిఫ్యూజ్ యొక్క త్వరణం కనిష్టంగా సర్దుబాటు చేయబడింది, ఇది పొరపై ఒత్తిడిని తగ్గిస్తుంది.గమనిక, సెంట్రిఫ్యూజ్ గమ్యస్థాన వేగాన్ని చేరుకున్న తర్వాత అపకేంద్రాన్ని వదిలివేయాలని నిర్ధారించుకోండి లేదా మీకు సమస్య ఉంటే, మీరు దాన్ని మొదటిసారిగా నిర్వహించలేరు.కుదురుకు పొర యొక్క ధోరణి సూచనల ప్రకారం సర్దుబాటు చేయబడింది (కోణీయ సెంట్రిఫ్యూజ్ కేసు పొర నుండి అక్షం లంబంగా ఉంటుంది).ఆచరణాత్మక ఉపయోగంలో, సాధారణ భ్రమణ వేగం సూచనలలో కంటే తక్కువగా ఉంటుంది, తద్వారా సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ యొక్క జీవితాన్ని పొడిగించవచ్చు.
3) ద్రవ్యరాశి మరియు గురుత్వాకర్షణ కేంద్రం రెండూ సమతుల్యతను చేరుకోవాలి.భ్రమణ వేగం మరియు త్వరణం చాలా వేగంగా ఉండవు, లేకుంటే నేరుగా అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ మెమ్బ్రేన్ దెబ్బతింటుంది.సెంట్రిఫ్యూగల్ అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ప్రారంభించబడింది (సెంట్రిఫ్యూజ్ 4 డిగ్రీలకు ప్రీకూల్ చేయబడింది).వేర్వేరు సెంట్రిఫ్యూజ్‌ల RPMని gకి మార్చిన తర్వాత, అది భిన్నంగా ఉంటుంది.సెంట్రిఫ్యూజ్ యొక్క త్వరణం కనిష్టంగా సర్దుబాటు చేయబడింది, ఇది పొరపై ఒత్తిడిని తగ్గిస్తుంది.గమనిక, సెంట్రిఫ్యూజ్ గమ్యస్థాన వేగాన్ని చేరుకున్న తర్వాత అపకేంద్రాన్ని వదిలివేయాలని నిర్ధారించుకోండి లేదా మీకు సమస్య ఉంటే, మీరు దాన్ని మొదటిసారిగా నిర్వహించలేరు.కుదురుకు పొర యొక్క ధోరణి సూచనల ప్రకారం సర్దుబాటు చేయబడింది (కోణీయ సెంట్రిఫ్యూజ్ కేసు పొర నుండి అక్షం లంబంగా ఉంటుంది).ఆచరణాత్మక ఉపయోగంలో, సాధారణ భ్రమణ వేగం సూచనలలో కంటే తక్కువగా ఉంటుంది, తద్వారా సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ యొక్క జీవితాన్ని పొడిగించవచ్చు.
(4) మిగిలిన 1mlకి కేంద్రీకరించబడినప్పుడు, 50ul బఫర్ ద్రావణాన్ని తీసుకోండి, 10ul ఫ్లోను జోడించి, అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌లో ప్రొటీన్‌లు లేవని నిర్ధారించడానికి ఏదైనా నీలం రంగు ఉందా అని చూడండి.ట్యూబ్ లీకైనట్లయితే, అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్‌ను ప్రారంభించడానికి పై పొరను మళ్లీ పోసి కొత్త ట్యూబ్‌లోకి ప్రవహించండి.ట్యూబ్‌లు మిస్ అయ్యాయో లేదో ఖచ్చితంగా గుర్తించడానికి, ఫ్లోత్రూకి ముందు 5mgml BSAతో 10నిమి సెంట్రిఫ్యూజ్, ప్రోటీన్ జిగురు లేదా బ్రాడ్‌ఫోర్డ్ క్రూడ్ అస్సేపై రన్ చేయండి మరియు మిగిలిన సాంద్రీకృత ప్రోటీన్ ద్రావణాన్ని (మంచుపై పని చేస్తుంది మరియు ప్రోటీన్‌లను వేడెక్కకుండా చేస్తుంది) జోడించడం ద్వారా కొనసాగించండి. ఏకాగ్రత మొత్తం జోడించబడింది.సెంట్రిఫ్యూగేషన్ సమయంలో ప్రొటీన్ల అవపాతం ఏర్పడి, ట్యూబ్ మూసివేతకు దారితీసినట్లయితే జాగ్రత్త వహించండి.అవపాతం సంభవించినట్లయితే, అవపాతం యొక్క నిర్దిష్ట కారణం అధిక ప్రోటీన్ గాఢత లేదా తగని బఫర్ అని నిర్ణయించండి;మొదటిది ఏకకాలంలో బహుళ అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌ల అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ద్వారా పరిష్కరించబడుతుంది, ఏకాగ్రత తగ్గుతుంది మరియు రెండోది ప్రోటీన్ యొక్క అవపాతం సంభవించే వరకు వివిధ బఫర్ పరిష్కారాలను మార్పిడి చేయడం ద్వారా పరిష్కరించబడుతుంది.
(4) మిగిలిన 1mlకి కేంద్రీకరించబడినప్పుడు, 50ul బఫర్ ద్రావణాన్ని తీసుకోండి, 10ul ఫ్లోను జోడించి, అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌లో ప్రొటీన్‌లు లేవని నిర్ధారించడానికి ఏదైనా నీలం రంగు ఉందా అని చూడండి.ట్యూబ్ లీకైనట్లయితే, అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్‌ను ప్రారంభించడానికి పై పొరను మళ్లీ పోసి కొత్త ట్యూబ్‌లోకి ప్రవహించండి.ట్యూబ్‌లు మిస్ అయ్యాయో లేదో ఖచ్చితంగా గుర్తించడానికి, ఫ్లోత్రూకి ముందు 5mgml BSAతో 10నిమి సెంట్రిఫ్యూజ్, ప్రోటీన్ జిగురు లేదా బ్రాడ్‌ఫోర్డ్ క్రూడ్ అస్సేపై రన్ చేయండి మరియు మిగిలిన సాంద్రీకృత ప్రోటీన్ ద్రావణాన్ని (మంచుపై పని చేస్తుంది మరియు ప్రోటీన్‌లను వేడెక్కకుండా చేస్తుంది) జోడించడం ద్వారా కొనసాగించండి. ఏకాగ్రత మొత్తం జోడించబడింది.సెంట్రిఫ్యూగేషన్ సమయంలో ప్రొటీన్ల అవపాతం ఏర్పడి, ట్యూబ్ మూసివేతకు దారితీసినట్లయితే జాగ్రత్త వహించండి.అవపాతం సంభవించినట్లయితే, అవపాతం యొక్క నిర్దిష్ట కారణం అధిక ప్రోటీన్ గాఢత లేదా తగని బఫర్ అని నిర్ణయించండి;మొదటిది ఏకకాలంలో బహుళ అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ట్యూబ్‌ల అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ ద్వారా పరిష్కరించబడుతుంది, ఏకాగ్రత తగ్గుతుంది మరియు రెండోది ప్రొటీన్ అవక్షేపం జరగకుండా వివిధ బఫర్ పరిష్కారాలను మార్పిడి చేయడం ద్వారా పరిష్కరించబడుతుంది.
(5) ప్రొటీన్‌ను కేంద్రీకరించడానికి మొదటి కొన్ని దశలు ఉపయోగించబడతాయి మరియు బఫర్‌ను మార్చాలనుకుంటే, కొత్త బఫర్‌ను (0.22um అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ మెంబ్రేన్ ద్వారా అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్) 1ml మొత్తం ప్రోటీన్‌కు శాంతముగా జోడించి, మూడు కోసం 1ml వరకు తిరిగి కేంద్రీకరించండి. వరుసగా సార్లు, కావలసిన ప్రోటీన్ ఏకాగ్రతపై ఆధారపడి తుది సాంద్రీకృత తుది వాల్యూమ్‌తో, సాధారణంగా 500ul కంటే ఎక్కువ కాదు, కానీ 200ul లోపల కూడా.ప్రతిసారీ కనీసం 10 × లేదా అంతకంటే ఎక్కువ వాల్యూమ్ ఎన్‌రిచ్‌మెంట్ ద్వారా గణించబడినట్లుగా, మూడు సందర్భాలలో 1000 × లేదా అంతకంటే ఎక్కువ, బఫర్ మార్పును సాధించండి.
(5) ప్రొటీన్‌ను కేంద్రీకరించడానికి మొదటి కొన్ని దశలు ఉపయోగించబడతాయి మరియు బఫర్‌ను మార్చాలనుకుంటే, కొత్త బఫర్‌ను (0.22um అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ మెంబ్రేన్ ద్వారా అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్) 1ml మొత్తం ప్రోటీన్‌కు శాంతముగా జోడించి, మూడు కోసం 1ml వరకు తిరిగి కేంద్రీకరించండి. వరుసగా సార్లు, కావలసిన ప్రోటీన్ ఏకాగ్రతపై ఆధారపడి తుది సాంద్రీకృత తుది వాల్యూమ్‌తో, సాధారణంగా 500ul కంటే ఎక్కువ కాదు, కానీ 200ul లోపల కూడా.ప్రతిసారీ కనీసం 10 × లేదా అంతకంటే ఎక్కువ వాల్యూమ్ ఎన్‌రిచ్‌మెంట్ ద్వారా గణించబడినట్లుగా, మూడు సందర్భాలలో 1000 × లేదా అంతకంటే ఎక్కువ, బఫర్ మార్పును సాధించండి.
పోస్ట్ సమయం: నవంబర్-09-2022