PCR ప్రయోగాలలో సాధారణంగా ఉపయోగించే అనేక ఎంజైమ్‌లు

పాలిమరేస్ చైన్ రియాక్షన్, సంక్షిప్తంగాPCRఆంగ్లంలో, నిర్దిష్ట DNA శకలాలు విస్తరించేందుకు ఉపయోగించే పరమాణు జీవశాస్త్ర సాంకేతికత.ఇది శరీరం వెలుపల ఒక ప్రత్యేక DNA ప్రతిరూపణగా పరిగణించబడుతుంది, ఇది DNA యొక్క చాలా చిన్న మొత్తాన్ని బాగా పెంచుతుంది.మొత్తం సమయంలోPCRప్రతిచర్య ప్రక్రియలో, ఒక తరగతి పదార్థాలు కీలక పాత్ర పోషిస్తాయి - ఎంజైములు.

1. టాక్ DNA

ప్రారంభ రోజుల్లో ప్రయోగాలలోPCR, శాస్త్రవేత్తలు Escherichia coli DNA పాలిమరేస్ Iని ఉపయోగించారు, కానీ ఈ ఎంజైమ్‌తో సమస్య ఉంది: ఇది ప్రతి చక్రాన్ని ప్రదర్శించిన ప్రతిసారీ కొత్త ఎంజైమ్‌ను భర్తీ చేయాలి, ఇది ఆపరేషన్ దశలను కొద్దిగా క్లిష్టతరం చేస్తుంది మరియు పూర్తిగా స్వయంచాలకంగా విస్తరించడం కష్టం.శాస్త్రవేత్తలు అనుకోకుండా 1988లో థెర్మస్ ఆక్వాటికస్ నుండి Taq DNA పాలిమరేస్‌ను వేరుచేసిన తర్వాత ఈ సమస్య పరిష్కరించబడింది. అప్పటి నుండి, DNA యొక్క ఆటోమేటిక్ యాంప్లిఫికేషన్ వాస్తవంగా మారింది.ఈ ఎంజైమ్ యొక్క ఆవిష్కరణ కూడా చేస్తుందిPCRసాంకేతికత అనుకూలమైన, ఆచరణాత్మక మరియు సార్వత్రిక సాంకేతికత.ప్రస్తుతం, Taq DNA పాలిమరేస్ DNA కిట్‌లలో అత్యంత సాధారణమైన పాలిమరేస్.

2. PfuDNA

పైన పేర్కొన్నట్లుగా, Taq DNaseలో పెద్ద బగ్ ఉంది, కాబట్టి శాస్త్రవేత్తలు సరిపోలకపోవడం వలన నిర్దిష్ట-కాని విస్తరణను నివారించడానికి Taq DNA పాలిమరేస్‌ను కొంత వరకు సవరించారు, ఫలితంగా సరికాని పరీక్ష ఫలితాలు వచ్చాయి.కానీ Taq DNA పాలిమరేస్ యొక్క మార్పు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద DNA పాలిమరేస్ యొక్క కార్యాచరణను నిరోధించగలదు.PfuDNA పాలిమరేస్ టాక్ DNA పాలిమరేస్ యొక్క పైన పేర్కొన్న ప్రతికూలతలను చక్కగా భర్తీ చేస్తుంది, తద్వారా PCR ప్రతిచర్య సాధారణంగా నిర్వహించబడుతుంది మరియు లక్ష్య జన్యు విస్తరణ యొక్క విజయవంతమైన రేటును సమర్థవంతంగా మెరుగుపరచవచ్చు.

3. రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ 1970లో కనుగొనబడింది. ఈ ఎంజైమ్ RNAను ఒక టెంప్లేట్‌గా, dNTPని సబ్‌స్ట్రేట్‌గా ఉపయోగిస్తుంది, బేస్ జత చేసే సూత్రాన్ని అనుసరిస్తుంది మరియు 5′-3′ దిశలో RNA టెంప్లేట్‌కు అనుబంధంగా DNA సింగిల్ స్ట్రాండ్‌ను సంశ్లేషణ చేస్తుంది.రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ ప్రాథమికంగా DNA లేదా RNA టెంప్లేట్‌ల నుండి DNA పాలిమరేస్ కార్యాచరణపై ఆధారపడి ఉంటుంది మరియు అందువల్ల 3′-5′ ఎక్సోన్యూకలీస్ కార్యాచరణ లేదు.అయినప్పటికీ, ఇది RNase H కార్యాచరణను కలిగి ఉంది, ఇది రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ యొక్క సంశ్లేషణ పొడవును కొంత వరకు పరిమితం చేస్తుంది.వైల్డ్ రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్టేజ్ యొక్క తక్కువ విశ్వసనీయత మరియు థర్మోస్టాబిలిటీ కారణంగా, శాస్త్రవేత్తలు కూడా దానిని సవరించారు.

కోసంPCRప్రయోగాలు, ప్రధాన వినియోగ వస్తువులు: వ్యక్తిగత PCR ట్యూబ్, 4/8-స్ట్రిప్ PCR ట్యూబ్, PCR ప్లేట్లు.

లాబియో యొక్కPCR వినియోగ వస్తువులుకింది వాటిని కలిగి ఉండండిప్రయోజనాలు:

PCR ప్లేట్లు: విస్తృత థర్మల్ సైక్లర్ అనుకూలత;అధిక-కాంట్రాస్ట్, సులభంగా గుర్తించడం;బాగా ఫ్లోరోసెన్స్ ప్రతిబింబం;మంచిదిఉష్ణ బదిలీ;ధృవీకరించబడిన DNase, RNase, DNA, PCR ఇన్హిబిటర్లు మరియు పైరోజెన్-రహితంగా పరీక్షించబడ్డాయి.

వ్యక్తిగత PCR గొట్టాలు: బాష్పీభవన-నిరోధకత;మంచిఉష్ణ బదిలీ;అద్భుతమైన ఆప్టికల్ క్లారిటీ; సర్టిఫైడ్ DNase, RNase, DNA, PCR ఇన్హిబిటర్లు మరియు పైరోజెన్ రహితంగా పరీక్షించబడ్డాయి.

4/8-స్ట్రిప్స్ PCR ట్యూబ్‌లు: అల్ట్రా-సన్నని గోడలు;అధిక స్పష్టత;మంచి ఫ్లోరోసెన్స్ ప్రతిబింబం;ఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ, ఆహార పరిశ్రమ మరియు పరమాణు జీవశాస్త్రంలో ఉపయోగించవచ్చు;అధిక-నాణ్యత, వర్జిన్ PP మెటీరియల్;సర్టిఫైడ్ DNase, RNase, DNA, PCR ఇన్హిబిటర్లు మరియు పరీక్షించబడిన పైరోజెన్-ఫ్రీ.